食品中滴滴涕、六六六的残留量的测定-下载亚博
2011-01-01
[1792]
1 原理
样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。
电子捕获检测器对于负电性强的化合物具有较高的灵敏度, 利用这一特点, 可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。
出峰顺序：α-666、γ-666、β-666、δ-666、p,p'-dde、o,p'-ddt、p,p'-ddd、p,p'-ddt。
2 试剂
使用的试剂一般系分析纯, 有机溶剂需经重蒸馏。
2.1 丙酮。
2.2 乙醚。
2.3 95%乙醇。
2.4 石油醚: 沸程30～60℃。
2.5 苯。
2.6 无水硫酸钠。
2.7 草酸钾。
2.8 硫酸。
2.9 2%硫酸钠溶液。
2.10 过氯酸-冰乙酸混合液:1:1。
2.11 六六六、滴滴涕标准溶液:精密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和p,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴滴、p,p'滴滴伊、o,p'-滴滴涕(α、β、γ、δ-666、p,p'-ddt、p,p'-ddd、p,p'-dde、o,p'-ddt)各10mg,溶于苯,分别移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混匀,每毫升含农药100μg,作为贮备液存于冰箱中。
2.12 六六六、滴滴涕标准使用液:临用时各吸取2.0ml,分别移入10ml容量瓶中, 各加苯至刻度, 混匀。每毫升相当农药20μg, 此浓度适用于薄层色谱法。用气相色谱法时，根据仪器灵敏度还需以己烷稀释至适宜浓度，一般为0.01μg/ml。
2.13 载体: 硅藻土, 80～100目, 气相色谱用。
2.14 固定液:ov-17及qf-1。
3 仪器
滕海公司 gc-2001(ecd)
4 操作方法
4.1 提取
4.1.1 粮食：称取20g粉碎后并通过20目筛的样品，置于250ml具塞锥形瓶中，加100ml石油醚，于电动振荡器上振荡30min，滤入150ml分液漏斗中，以20～30ml石油醚分数次洗涤残渣，洗液并入分液漏斗中, 以石油醚稀释至100ml。
4.1.2 蔬菜、水果: 称取200g样品，置于捣碎机中捣碎1～2min(若样品含水分少，可加一定量的水)。称取相当于原样50g的匀浆，加100ml丙酮,振荡lmin, 浸泡1h，过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次10ml，洗液并入滤液，置于500ml分液漏斗中，加80ml石油醚，振摇1min，加200ml2％硫酸钠溶液，振摇1min，静置分层,弃去下层。将上层石油醚液经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗,滤入另一分液漏斗中，再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，并以石油醚稀释至100ml。
4.1.3 动物油：称取5g炼过的样品，溶于250ml石油醚，移入500ml分液漏斗中。
4.1.4 植物油：称取10g样品，以250ml石油醚溶解，移入500ml分液漏斗中。
4.1.5 乳与乳制品: 称取100g鲜乳(乳制品取样量按鲜乳折算)，移入500ml分液漏斗中。
加100ml乙醇、1g草酸钾，猛摇1min，加100ml乙醚，摇匀。加100ml石油醚，猛摇2min。
静置10min，弃去下层。将有机溶剂层经盛20g无水硫酸钠的漏斗，小心缓慢地滤入250ml锥形瓶中,再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中。以脂肪提取器或浓缩器蒸除有机溶剂,残渣为黄色透明油状物。再以石油醚溶解，移入150ml分液漏斗中，以石油醚稀释至100ml。
4.1.6 蛋与蛋制品: 取鲜蛋10个,去壳，全部混匀。称取10g(蛋制品取样量按鲜蛋折算)置于250ml具塞锥形瓶中，加100ml丙酮，在电动振荡器上振荡30min，过滤。用丙酮洗残渣数次,洗液并入滤液中用脂肪提取器或浓缩器将丙酮蒸除，在浓缩过程中,溶液变粘稠,常出现泡沫，应小心注意不使其溢出。将残渣用50ml石油醚移入分液漏斗中。振荡,静置分层。将下层残渣放入另一分液漏斗中,加20ml石油醚,振摇,静置分层, 弃去残渣,合并石油醚，经盛约15g无水硫酸钠的漏斗滤入分液漏斗中，再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7 各种肉类及其他动物组织
4.1.7.1 甲法: 称取纹碎混匀的20g样品，置于乳钵中，加约80g无水硫酸钠研磨，无水硫酸钠用量以样品研磨后呈干粉状为宜。将研磨后的样品和硫酸钠一并移入250ml具塞锥形瓶中，加100ml石油醚，于电动振荡器上振摇30min。抽滤，残渣用约100ml石油醚分数次洗涤, 洗液并入滤液中。将全部滤液用脂肪提取器或浓缩器蒸除石油醚，残渣为油状物。以石油醚溶解残渣，移入150ml分液漏斗中，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7.2 乙法: 称取绞碎混匀的20g样品,置于烧杯中，加入40ml1:1过氯酸-冰乙酸混合液,上面覆盖表面皿，于80℃的水浴上消化4～5h。将上述消化液移入500ml分液漏斗中，以40ml水洗烧杯,洗液并入分液漏斗。以30、20、20、20ml石油醚(或环己烷)分四次从消化液中提取农药。合并石油醚(或环己烷)并使之通过高约4～5cm的无水硫酸钠小柱，滤入100ml容量瓶中, 以少量石油醚(或环己烷)洗小柱, 洗液并入容量瓶中, 然后稀释至刻度，混匀。
4.2 净化
4.2.1 于100ml样品石油醚提取液(动、植物油样品除外)中加10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后，将分液漏斗倒置，打开活塞放气，然后振摇半分钟，静置分层。弃去下层溶液，上层溶液由分液漏斗上口倒至另一250ml分液漏斗中，用少许石油醚洗原分液漏斗后，并入250ml分液漏斗中，加100ml2％硫酸钠溶液，振摇后静置分层。弃去下层水溶液，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗过滤，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。洗液并入滤液中，以石油醚稀释至一定体积，供气相色谱法用。或将全部溶液浓缩至1ml，进行薄层色谱测定。经上述净化步骤处理过的样液，如在测定时出现干扰，可再以硫酸处理。
4.2.2 于250ml动、植物油样品石油醚提取液中，加25ml硫酸。振摇数下后，将分液漏斗倒置,打开活塞放气,然后振摇半分钟,静置分层,弃去下层溶液。再加25ml硫酸,振摇30s,静置分层，弃去下层溶液。上层溶液由分液漏斗上口倒于另一500ml分液漏斗中，用少许石油醚洗原分液漏斗，洗液并入分液漏斗中。加250ml2％硫酸钠溶液，摇匀，静置分层。以下按4.2.1“弃去下层水溶液”起依法操作。
4.3 色谱条件
4.3.1 氚源电子捕获检测器
4.3.1.1 气化室温度：190℃。
4.3.1.2 色谱柱温度: 160℃。
4.3.1.3 检测器温度: 165℃。
4.3.1.4 载气(氮气)流速：60ml/ min。
4.3.1.5 极化电压: 30v。
4.3.2 ni63电子捕获检测器
4.3.2.1 气化室温度：215℃。
4.3.2.2 色谱柱温度：195℃。
4.3.2.3 检测器温度：225℃。
4.3.2.4 载气(氮气)流速：90ml/min。
4.3.3 色谱柱：内径3～4mm，长1.2～2m的玻璃柱，内装涂以1.5％ov—17和2％qf—1的混合固定液的80～100目硅藻土。
4.3.4 测量与计算
电子捕获检测器的线性范围狭窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应地制备各组分的标准曲线，从而计算样品中的含量。
六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物含量按式(1)计算。
a1×1000
x1 = ─────────── ................(1)
m1 × v2/v1 × 1000
式中:x1——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量,mg/kg;
a1——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng;
v1——样品净化液体积，ml；
v2——样液进样体积，μl;
m1——样品质量，g。
样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。
电子捕获检测器对于负电性强的化合物具有较高的灵敏度, 利用这一特点, 可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。
出峰顺序：α-666、γ-666、β-666、δ-666、p,p'-dde、o,p'-ddt、p,p'-ddd、p,p'-ddt。
2 试剂
使用的试剂一般系分析纯, 有机溶剂需经重蒸馏。
2.1 丙酮。
2.2 乙醚。
2.3 95%乙醇。
2.4 石油醚: 沸程30～60℃。
2.5 苯。
2.6 无水硫酸钠。
2.7 草酸钾。
2.8 硫酸。
2.9 2%硫酸钠溶液。
2.10 过氯酸-冰乙酸混合液:1:1。
2.11 六六六、滴滴涕标准溶液:精密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和p,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴滴、p,p'滴滴伊、o,p'-滴滴涕(α、β、γ、δ-666、p,p'-ddt、p,p'-ddd、p,p'-dde、o,p'-ddt)各10mg,溶于苯,分别移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混匀,每毫升含农药100μg,作为贮备液存于冰箱中。
2.12 六六六、滴滴涕标准使用液:临用时各吸取2.0ml,分别移入10ml容量瓶中, 各加苯至刻度, 混匀。每毫升相当农药20μg, 此浓度适用于薄层色谱法。用气相色谱法时，根据仪器灵敏度还需以己烷稀释至适宜浓度，一般为0.01μg/ml。
2.13 载体: 硅藻土, 80～100目, 气相色谱用。
2.14 固定液:ov-17及qf-1。
3 仪器
滕海公司 gc-2001(ecd)
4 操作方法
4.1 提取
4.1.1 粮食：称取20g粉碎后并通过20目筛的样品，置于250ml具塞锥形瓶中，加100ml石油醚，于电动振荡器上振荡30min，滤入150ml分液漏斗中，以20～30ml石油醚分数次洗涤残渣，洗液并入分液漏斗中, 以石油醚稀释至100ml。
4.1.2 蔬菜、水果: 称取200g样品，置于捣碎机中捣碎1～2min(若样品含水分少，可加一定量的水)。称取相当于原样50g的匀浆，加100ml丙酮,振荡lmin, 浸泡1h，过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次10ml，洗液并入滤液，置于500ml分液漏斗中，加80ml石油醚，振摇1min，加200ml2％硫酸钠溶液，振摇1min，静置分层,弃去下层。将上层石油醚液经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗,滤入另一分液漏斗中，再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，并以石油醚稀释至100ml。
4.1.3 动物油：称取5g炼过的样品，溶于250ml石油醚，移入500ml分液漏斗中。
4.1.4 植物油：称取10g样品，以250ml石油醚溶解，移入500ml分液漏斗中。
4.1.5 乳与乳制品: 称取100g鲜乳(乳制品取样量按鲜乳折算)，移入500ml分液漏斗中。
加100ml乙醇、1g草酸钾，猛摇1min，加100ml乙醚，摇匀。加100ml石油醚，猛摇2min。
静置10min，弃去下层。将有机溶剂层经盛20g无水硫酸钠的漏斗，小心缓慢地滤入250ml锥形瓶中,再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中。以脂肪提取器或浓缩器蒸除有机溶剂,残渣为黄色透明油状物。再以石油醚溶解，移入150ml分液漏斗中，以石油醚稀释至100ml。
4.1.6 蛋与蛋制品: 取鲜蛋10个,去壳，全部混匀。称取10g(蛋制品取样量按鲜蛋折算)置于250ml具塞锥形瓶中，加100ml丙酮，在电动振荡器上振荡30min，过滤。用丙酮洗残渣数次,洗液并入滤液中用脂肪提取器或浓缩器将丙酮蒸除，在浓缩过程中,溶液变粘稠,常出现泡沫，应小心注意不使其溢出。将残渣用50ml石油醚移入分液漏斗中。振荡,静置分层。将下层残渣放入另一分液漏斗中,加20ml石油醚,振摇,静置分层, 弃去残渣,合并石油醚，经盛约15g无水硫酸钠的漏斗滤入分液漏斗中，再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7 各种肉类及其他动物组织
4.1.7.1 甲法: 称取纹碎混匀的20g样品，置于乳钵中，加约80g无水硫酸钠研磨，无水硫酸钠用量以样品研磨后呈干粉状为宜。将研磨后的样品和硫酸钠一并移入250ml具塞锥形瓶中，加100ml石油醚，于电动振荡器上振摇30min。抽滤，残渣用约100ml石油醚分数次洗涤, 洗液并入滤液中。将全部滤液用脂肪提取器或浓缩器蒸除石油醚，残渣为油状物。以石油醚溶解残渣，移入150ml分液漏斗中，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7.2 乙法: 称取绞碎混匀的20g样品,置于烧杯中，加入40ml1:1过氯酸-冰乙酸混合液,上面覆盖表面皿，于80℃的水浴上消化4～5h。将上述消化液移入500ml分液漏斗中，以40ml水洗烧杯,洗液并入分液漏斗。以30、20、20、20ml石油醚(或环己烷)分四次从消化液中提取农药。合并石油醚(或环己烷)并使之通过高约4～5cm的无水硫酸钠小柱，滤入100ml容量瓶中, 以少量石油醚(或环己烷)洗小柱, 洗液并入容量瓶中, 然后稀释至刻度，混匀。
4.2 净化
4.2.1 于100ml样品石油醚提取液(动、植物油样品除外)中加10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后，将分液漏斗倒置，打开活塞放气，然后振摇半分钟，静置分层。弃去下层溶液，上层溶液由分液漏斗上口倒至另一250ml分液漏斗中，用少许石油醚洗原分液漏斗后，并入250ml分液漏斗中，加100ml2％硫酸钠溶液，振摇后静置分层。弃去下层水溶液，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗过滤，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。洗液并入滤液中，以石油醚稀释至一定体积，供气相色谱法用。或将全部溶液浓缩至1ml，进行薄层色谱测定。经上述净化步骤处理过的样液，如在测定时出现干扰，可再以硫酸处理。
4.2.2 于250ml动、植物油样品石油醚提取液中，加25ml硫酸。振摇数下后，将分液漏斗倒置,打开活塞放气,然后振摇半分钟,静置分层,弃去下层溶液。再加25ml硫酸,振摇30s,静置分层，弃去下层溶液。上层溶液由分液漏斗上口倒于另一500ml分液漏斗中，用少许石油醚洗原分液漏斗，洗液并入分液漏斗中。加250ml2％硫酸钠溶液，摇匀，静置分层。以下按4.2.1“弃去下层水溶液”起依法操作。
4.3 色谱条件
4.3.1 氚源电子捕获检测器
4.3.1.1 气化室温度：190℃。
4.3.1.2 色谱柱温度: 160℃。
4.3.1.3 检测器温度: 165℃。
4.3.1.4 载气(氮气)流速：60ml/ min。
4.3.1.5 极化电压: 30v。
4.3.2 ni63电子捕获检测器
4.3.2.1 气化室温度：215℃。
4.3.2.2 色谱柱温度：195℃。
4.3.2.3 检测器温度：225℃。
4.3.2.4 载气(氮气)流速：90ml/min。
4.3.3 色谱柱：内径3～4mm，长1.2～2m的玻璃柱，内装涂以1.5％ov—17和2％qf—1的混合固定液的80～100目硅藻土。
4.3.4 测量与计算
电子捕获检测器的线性范围狭窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应地制备各组分的标准曲线，从而计算样品中的含量。
六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物含量按式(1)计算。
a1×1000
x1 = ─────────── ................(1)
m1 × v2/v1 × 1000
式中:x1——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量,mg/kg;
a1——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng;
v1——样品净化液体积，ml；
v2——样液进样体积，μl;
m1——样品质量，g。
